N煤mero m谩s probable (NMP)

Por Quisti谩n Garc铆a Hylary

Es una estrategia eficiente de estimaci贸n de densidades poblacionales especialmente cuando una evaluaci贸n cuantitativa de c茅lulas individuales no es factible.

La t茅cnica se basa en la determinaci贸n de presencia o ausencia en r茅plicas de diluciones consecutivas de atributos particulares de microorganismos presentes en muestras de suelos u otros ambientes. Por lo tanto, un requisito importante de este m茅todo es la necesidad de poder reconocer un atributo particular de la poblaci贸n en el medio de crecimiento a utilizarse. El estimado de densidad poblacional se obtiene del patr贸n de ocurrencia de ese atributo en diluciones seriadas y el uso de una tabla probabil铆stica. El atributo particular a usarse en esta t茅cnica es la capacidad de microorganismos a formar colonias en medios s贸lidos de crecimiento.

La metodolog铆a es la siguiente:

1)      Muestras: colecte as茅pticamente las muestras frescas de suelo (10 gr) de varios lugares, u obtenga muestras de agua (10 ml) de lagos, r铆os o charcos.

2)      Extracci贸n de microorganismos viables: para muestras de suelo, las c茅lulas podr谩n ser removidas y homogenizadas a帽adiendo 1 gr de la muestra a un tubo de ensayo que contenga 9 ml de soluci贸n salina. Agite moderadamente por 5 minutos en un vortex.

3)      Diluciones en serie: el extracto de suelo puede ser diluido serialmente transfiriendo 1ml a un tubo con 9 ml de 0.85% NaCl. Repetir en serie el procedimiento hasta alcanzar una diluci贸n 10^-7. Para  muestras l铆quidas, mezcle bien la muestra y proceda a preparar las diluciones seriadas seg煤n el procedimiento anterior.

4)      Placas Petri: utilizando un marcador, dividir la caja Petri en cinco zonas de igual tama帽o. Use una caja por cada muestra. Rotule cada zona con el factor de diluci贸n a ser inoculado.

5)      Inoculaci贸n: transfiera 5碌l de la diluci贸n apropiada al 谩rea correspondiente. Repita esta operaci贸n cinco veces por cada diluci贸n.

6)      Permita que el inoculo seque sobre el medio de crecimiento. Selle la placa con una trilladle de parafina, invierta la placa e inocule a 25潞C por 7 d铆as.

7)      Evaluaci贸n del crecimiento: para cada diluci贸n es ascendencia evalu茅 el crecimiento o No crecimiento sobre cada replica inoculada. Reporte los resultados como se indica a continuaci贸n:

DATOS Y ANALISIS

Con ayuda de la siguiente tabla, determine la poblaci贸n estimada para su muestra. Si el patr贸n de respuestas no se encuentra en la tabla, se promedia el valor estimado del patr贸n superior e inferior en la tabla. Estos valores son el NMP sin ajustar. Para calcular la densidad poblacional de la muestra, entonces tendr谩 que multiplicar el NMP sin ajustar por el factor de correcci贸n de volumen, por el reciproco del factor de diluci贸n menor inoculado en la placa. 

Por Ram铆rez Hern谩ndez Jessica

EL METODO DE NUMERO MAS PROBABLE (NMP) es una estrategia eficiente de estimaci贸n de densidades poblacionales especialmente cuando una evaluaci贸n cuantitativa de c茅lulas individuales no es factible. La t茅cnica se basa en la determinaci贸n de presencia o ausencia (pos o neg) en r茅plicas de diluciones consecutivas de atributos particulares de microorganismos presentes en muestras de suelo u otros ambientes. Por lo tanto, un requisito importante de este m茅todo es la necesidad de poder reconocer un atributo particular de la poblaci贸n(es) en el medio de crecimiento a utilizarse. El estimado de densidad poblacional se obtiene del patr贸n de ocurrencia de ese atributo en diluciones seriadas y el uso de una tabla probabil铆stica. Algunas de las ventajas del NMP son: (i) la capacidad de estimar tama帽os poblacionales basados en atributos relacionados a un proceso (selectividad); por ejemplo se puede determinar la densidad poblacional de organismos que pueden nodular leguminosas en una muestra de suelo usando el m茅todo de infecci贸n de plantas, (ii) provee una recuperaci贸n uniforme de las poblaciones microbianas de suelos diversificados, (iii) determina s贸lo organismos vivos y activos metab贸licamente, y (iv) suele ser m谩s r谩pido e igual de confiable que los m茅todos tradicionales de esparcimiento en platos de cultivo, entre otros.

METODOLOGIA

1. Muestras: Colecte as茅pticamente muestras frescas de suelo (10 g) de varios lugares u obtenga muestras de agua (10 ml) de lagos, r铆os o charcas.

2. Extracci贸n de microorganismos viables: Para muestras de suelo, las c茅lulas podr谩n ser removidas y homogenizadas a帽adiendo 1 g de muestra a un tubo de ensayo que contenga 9 ml de soluci贸n salina. Agite moderadamente por 5 minutos en un vortex.

3. Diluciones en serie: El extracto de suelo puede ser diluido seriadamente transfiriendo 1 ml a un tubo con 9 ml de 0.85% NaCl. Cada transferencia corresponde a una diluci贸n de 1 en 10. Repita en serie el procedimiento de diluci贸n hasta alcanzar la diluci贸n 10-7. Para muestras l铆quidas, mezcle bien la muestra y proceda a preparar las diluciones seriadas como fueron descritas anteriormente.

4. Placas Petri: Utilizando un marcador, divida la placa Petri en cinco zonas de igual tama帽o. Use una placa por cada muestra. Rotule cada zona con el factor de diluci贸n a ser inculcado.

5. Inoculaci贸n: Transfiera 5 碌l de la diluci贸n apropiada al 谩rea correspondiente. Repita esta operaci贸n cinco veces por cada diluci贸n:

6. Permita que el in贸culo seque sobre el medio de crecimiento. Selle la placa con un tirillade parafina. Invierta la placa e incube a 25°C por 7 d铆as.

7. Evaluaci贸n de crecimiento: Para cada diluci贸n en ascendencia eval煤e el crecimiento o no crecimiento sobre cada r茅plica inoculada.

Datos y An谩lisis:

Utilizando los valores ofrecidos en la tabla 1, determine la poblaci贸n estimada para su muestra (ej., 5-5-3-2-0: 1,383). De su patr贸n de respuestas no estar en la tabla, promedie el valor estimado del patr贸n superior e inferior presente en la tabla 1 (ej., 5-4-1-1-0 no est谩 en la tabla, entonces promedie 5-4-1-0-0 (169) y 5-4-2-0-0 (216) como el resultado m谩s apropiado: 5-4-1-1-0 = (169+216)/2 = 193). Este valor obtenido es el NMP sin ajustar.

Para calcular la densidad poblacional de la muestra, entonces tendr谩 que multiplicar el NMP sin ajustar por el factor de correcci贸n de volumen por el rec铆proco del factor de diluci贸n menor inoculado en la placa (ej., 5-5-3-2-0: 1,383 X 200 X 1000 = 2.78 x 108 c茅lulas/g de suelo).

Por Ramos Franco Michelle

En este m茅todo el n煤mero m谩s probable es tambi茅n conocido como el m茅todo de los ceros de pisson es una forma de obtener datos cuantitativos en concentraci贸n de elementos diversos a partir de datos de incidencia +/- .

Es una estrategia eficiente para estimar densidades de poblaci贸n que se emplean cuando una evaluaci贸n cuantitativa de elementos individuales no es favorable. El m茅todo de basar en determinar la presencia o ausencia  (+ o -)  de atributos espec铆ficos de microorganismos en copias obtenidas por diluciones consecutivas a partir de las muestras de suelos u otros ambientes

Algunas de las ventajas de NMP son:

• La capacidad de estimar tama帽os poblacionales basadas en atributos relacionados a un proceso (selectividad); por ejemplo, se puede determinar la densidad poblacional de organismos que pueden hodular leguminosas en una muestra de suelo usando el m茅todo de infecci贸n de plantas
• Provee una recuperaci贸n uniforme de las poblaciones microbianas de suelos diversificados
• Determino solo organismos vivos y activos metab贸licamente
• Suelen ser m谩s r谩pido igual de confiable de los m茅todos tradicionales de espaciamiento en plantas de cultivo entre otras
• Se utiliza para contar microorganismos que son diferentes de cultivar en medio solido

Por Rangel Osorio Hugo

EL METODO DE NUMERO MAS PROBABLE (NMP) es una estrategia eficiente de estimaci贸n de densidades poblacionales especialmente cuando una evaluaci贸n cuantitativa de c茅lulas individuales no es factible. La t茅cnica se basa en la determinaci贸n de presencia o ausencia (pos o neg) en r茅plicas de diluciones consecutivas de atributos particulares de microorganismos presentes en muestras de suelo u otros ambientes. Por lo tanto, un requisito importante de este m茅todo es la necesidad de poder reconocer un atributo particular de la poblaci贸n(es) en el medio de crecimiento a utilizarse. El estimado de densidad poblacional se obtiene del patr贸n de ocurrencia de ese atributo en diluciones seriadas y el uso de una tabla probabil铆stica.

1.  Muestras: Colecte as茅pticamente muestras frescas de suelo (10 g) de varios lugares u obtenga muestras de agua (10 ml) de lagos, r铆os o charcas.
2.  Extracci贸n de microorganismos viables: Para muestras de suelo, las c茅lulas podr谩n ser removidas y homogenizadas a帽adiendo 1 g de muestra a un tubo de ensayo que contenga 9 ml de soluci贸n salina. Agite moderadamente por 5 minutos en un vortex.
3. Diluciones en serie: El extracto de suelo puede ser diluido seriadamente transfiriendo 1 ml a un tubo con 9 ml de 0.85% NaCl. Cada transferencia corresponde a una diluci贸n de 1 en 10. Repita en serie el procedimiento de diluci贸n hasta alcanzar la diluci贸n 10-7. Para muestras l铆quidas, mezcle bien la muestra y proceda a preparar las diluciones seriadas como fueron descritas anteriormente.
4. Placas Petri: Utilizando un marcador, divida la placa Petri en cinco zonas de igual tama帽o. Use una placa por cada muestra. Rotule cada zona con el factor de diluci贸n a ser inoculado
5. Inoculaci贸n: Transfiera 5 碌l de la diluci贸n apropiada al 谩rea correspondiente. Repita esta operaci贸n cinco veces por cada diluci贸n
6. Permita que el in贸culo seque sobre el medio de crecimiento. Selle la placa con un Tirilla de parafina. Invierta la placa e incube a 25°C por 7 d铆as.
7. Evaluaci贸n de crecimiento: Para cada diluci贸n en ascendencia evalu茅 el crecimiento o no crecimiento sobre cada r茅plica inoculada.

Por Rasc贸n Castrej贸n Lizeth

El m茅todo del N煤mero m谩s probable (NMP) tambi茅n conocido como el m茅todo de los ceros de Poisson, es una forma de obtener datos cuantitativos en concentraciones de elementos discretos a partir de datos de incidencia positiva/negativa. Es una estrategia eficiente para estimar densidades de poblaci贸n que se emplea cuando una evaluaci贸n cuantitativa de elementos individuales no es factible. El m茅todo se basa en determinar la presencia o ausencia (positivo o negativo) de atributos espec铆ficos de microorganismos en copias obtenidas por diluciones consecutivas a partir de muestras de suelo u otros ambientes. Se basa en el principio de que una 煤nica c茅lula viva puede desarrollarse y producir un cultivo turbio. El m茅todo requiere la realizaci贸n de una serie de diluciones en serie de la muestra de cultivo, en un medio l铆quido adecuado para el crecimiento de dicho organismo de un volumen diez veces mayor. Luego, se incuban las muestras de esos tubos y, pasado un tiempo, se examinan los tubos. Aquellos tubos que recibieron una o m谩s c茅lulas microbianas procedentes de la muestra, se pondr谩n turbios, mientras que los tubos que no recibieron ninguna c茅lula permanecer谩n transparentes.

Algunas de las ventajas del NMP son:

·         La capacidad de estimar tama帽os poblacionales basados en atributos relacionados a un proceso (selectividad); por ejemplo se puede determinarla densidad poblacional de organismos que pueden nodular leguminosas en una muestra de suelo usando el m茅todo de infecci贸n de plantas.

·         Provee una recuperaci贸n uniforme de las poblaciones microbianas de suelos diversificados.

·         Determina s贸lo organismos vivos y activos metab贸licamente.

·         Suele ser m谩s r谩pido e igual de confiable que los m茅todos tradicionales de esparcimiento en platos de cultivo, entre otros.

Se utiliza para contar microorganismos que son dif铆ciles de cultivar en medio s贸lido. Tambi茅n se usa para determinar el n煤mero de c茅lulas de un cultivo mixto que pueden crecer en un medio l铆quido determinado. Por ejemplo, puede emplearse para determinar la contaminaci贸n del agua potable, determinando el n煤mero de bacterias que pueden crecer en un medio que contiene lactosa. Estas bacterias probablemente sean Escherichia Coli provenientes de aguas residuales contaminadas, y la presencia de E. Coli en el agua potable es una prueba presuntiva de contaminaci贸n

Por R铆os Palacios Selene

El m茅todo del N煤mero m谩s probable (NMP) (Most probable number - MPN - en ingl茅s), tambi茅n conocido como el m茅todo de los ceros de Poisson, es una forma de obtener datos cuantitativos en concentraciones de elementos discretos a partir de datos de incidencia positiva/negativa. Es una estrategia eficiente para estimar densidades de poblaci贸n que se emplea cuando una evaluaci贸n cuantitativa de elementos individuales no es factible.

El m茅todo se basa en determinar la presencia o ausencia (positivo o negativo) de atributos espec铆ficos de microorganismos en copias obtenidas por diluciones consecutivas a partir de muestras de suelo u otros ambientes. Se basa en el principio de que una 煤nica c茅lula viva puede desarrollarse y producir un cultivo turbio. El m茅todo requiere la realizaci贸n de una serie de diluciones en serie de la muestra de cultivo, en un medio l铆quido adecuado para el crecimiento de dicho organismo de un volumen diez veces mayor. Luego, se incuban las muestras de esos tubos y, pasado un tiempo, se examinan los tubos. Aquellos tubos que recibieron una o m谩s c茅lulas microbianas procedentes de la muestra, se pondr谩n turbios, mientras que los tubos que no recibieron ninguna c茅lula permanecer谩n transparentes.

Al aumentar el factor de diluci贸n, se alcanza un punto en el que algunos tubos contendr谩n tan s贸lo un microorganismo y otros tubos no contendr谩n ninguno. Al calcular la probabilidad de que los tubos no hayan recibido ninguna c茅lula, se puede estimar el n煤mero m谩s probable de microorganismos presentes en la muestra original, a partir de una tabla estad铆stica

Aplicaci贸n

Este m茅todo se usa para contar microorganismos dif铆ciles de cultivar en medio s贸lido,o para determinar el n煤mero de c茅lulas que pueden crecer en un medio l铆quido determinado, como el an谩lisis para determinar la contaminaci贸n del agua potable, determinando el n煤mero de bacterias Escherichia coli que pueden crecer en un medio con lactosa. La presencia de E. coli en el agua potable es una prueba de contaminaci贸n.

En microbiolog铆a, el m茅todo se emplea habitualmente realizando diluciones en serie de un cultivo de bacterias en un medio de crecimiento, y luego divisiones adicionales en serie hasta obtener partes al铆cuotas. Los cultivos son incubados y evaluados a ojo, eludiendo el tedioso recuento de colonias, o el caro y tedioso recuento microsc贸pico.